METODOS DE COLORACION
El tamaño de la mayoría de las células bacterianas es tal que resultan difíciles de ver con el
microscopio óptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la célula y el medio que la
rodea, y el medio más simple de aumentar el contraste es la utilización de colorantes. Estos
pueden emplearse para distinguir entre tipos diferentes de células es para revelar la presencia de
determinados constituyentes celulares, tales como flagelos, esporas, cápsulas, paredes celulares,
centros de actividad respiratoria, etc.
La mayoría de los colorantes son compuestos orgánicos que tienen alguna afinidad específica por
los materiales celulares. Muchos colorantes utilizados con frecuencia son moléculas cargadas
positivamente (cationes) y se combinación intensidad con los constituyentes celulares cargados
negativamente, tales como los ácidos nucleicos y los polisacáridos ácidos. Ejemplos de colorantes
catiónicos son el azul de metileno, el cristal violeta y la safranina. Otros colorantes son moléculas
cargadas negativamente (aniones) y se combinan con los constituyentes celulares cargados
positivamente, tales como muchas proteínas. Esos colorantes incluyen la eosina, la fucsina ácida
y el rojo Congo. Otro grupo de colorantes son sustancias liposolubles. Los colorantes de este
grupo se combinan con los materiales lipídicos de la célula, usándose a menudo para revelar la
localización de las gotículas o depósitos de grasa. Un ejemplo de colorante liposoluble es el negro
Sudán.
Algunos colorantes teñirán mejor sólo después de que la célula haya sido tratada con otra
sustancia química, que no es un colorante por sí mismo. Esta sustancia se denomina mordiente.
Un mordiente habitual es el ácido tánico. El mordiente se combina con un constituyente celular y
lo altera de modo que ahora sí podrá atacar el colorante.
Método de Gram
La tinción de Gram es probablemente la más conocida; es de tipo diferencialy sirve para
distinguir a los microorganismos por morfología y composición.
Hay que tener en cuenta que se debe hacer la tinción cuando el cultivo está en fase exponencial,
ya que en fase estacionaria (“vejez”) se pueden confundir las gram positivas con las negativas.
Esto ocurre debido a la perdida de capas de peptidoglicano por parte de bacterias gram positivas.
Colorantes
1- Colorante Cristal Violeta:
○ a. Cristal Violeta 2 g
○ b. Etanol 95% 20 ml
○c. Oxalato de amonio 0,8 g
○ d. Agua Destilada 100 ml 2-
Solución de Iodo:
○ a. Ioduro de Potasio 2 g
○b. Iodo Metálico 1 g
○ c. Agua Destilada 100 ml 3-
Solución Decolorante:
○ a. Acetona 20 ml
